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托拉斯假单胞菌PCR试剂盒
产品及特点：
细菌性褐斑病的病原菌为托拉斯假单胞杆菌（Pseudomonas tolaasii），其产生的细胞外毒素－托斯毒素（tolaasin）可直接破坏平菇菌丝的细胞膜，平菇菌盖表面产生黄褐色或深褐色的斑点，使染病子实体的商品价值大大降低，严重影响平菇生产的经济效益。因此，了解托拉斯假单胞杆菌致病力状况，对生产中平菇品种的选择和抗病育种均具有重要意义。本产品是根据PCR 原理开发的托拉斯假单胞菌检测试剂盒，它具有下列特点：1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增托拉斯假单胞菌，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：
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编号 |
成分 |
规格 |
|
试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL（红盖） |
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试剂二 |
超纯水 |
1 mL（亮黄色） |
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试剂三 |
托拉斯假单胞菌 PCR 引物混合液 |
100 μL（白盖） |
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试剂四 |
托拉斯假单胞菌 PCR 阳性对照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黄盖） |
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试剂五 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。自备试剂：
样品 RNA。使用方法：
一、样品 DNA 的制备：1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 托拉斯假单胞菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
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成份 |
N+2 个样品管 |
PCR 阴性对照 |
PCR阳性对照 |
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PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
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托拉斯假单胞菌PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2个样品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
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PCR 阴性对照（水） |
-- |
18μL |
-- |
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PCR 阳性对照（托拉斯假单胞菌PCR阳性对照1000倍稀释液） |
-- |
-- |
18μL |
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过程 |
温度 |
时间 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反应35个循环 |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
