布鲁氏杆菌属通用PCR试剂盒

产品及特点：

布鲁氏菌�。╞rucellosis）又称地中海弛张热，马耳他热，波浪热或波状热，是由布鲁氏菌(Brucellae)引起的人畜共患性全身传染病。布鲁氏菌为革兰氏阴性短小杆菌，初次分离时多呈球状，球杆状和卵圆形，故名。根据宿主的不同，布鲁氏菌分为 10 个种。目前已知有 60 多种家畜、家禽，野生动物是布鲁氏菌的宿主。与人类有关的传染源主要是牛布鲁氏菌（Brucellaabortus）、羊布鲁氏菌（Brucella melitensis）及猪布鲁氏菌（Brucellasuis）。临床上以羊、牛、猪三种意义最大，羊种致病力最强。因此基于 PCR的快速检测羊、牛、猪种布鲁氏菌病具有重要的应用价值。本产品就是专门用于检测羊、牛、猪种布鲁氏菌病的 PCR 试剂盒，

1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增布鲁氏杆菌属通用，与其他病原没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1mL（红盖）
试剂二	超纯水	1mL（亮黄色）
试剂三	布鲁氏杆菌属通用PCR引物混合液	100μL（白盖）
试剂四	布鲁氏杆菌属通用PCR阳性对照（1×10E8 /μL）	50μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂：

样品 DNA。

使用方法：

一、样品 DNA 的制备：

1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提�。ㄒ桓鲅分票秆粜远哉蘸鸵桓鲅分票敢跣远哉�。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL布鲁氏杆菌属通用PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应(40μL 体系)：

3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
布鲁氏杆菌属通用PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR阳性对照（布鲁氏杆菌属通用PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

四、特别提示：

本公司的所有产品，仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

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布鲁氏杆菌属通用PCR试剂盒说明书
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