斑点叉尾鮰病毒PCR试剂盒

产品及特点：

斑点叉尾鮰病毒(Channel Catfish Virus，CCV) 是鮰疱疹病毒Ⅰ型，属疱疹病毒科，呈二十面体，有囊膜，直径 175～200nm，病毒核酸为双链 DNA。该病毒引起斑点叉尾鮰病毒�。饕腥景叩悴嫖蝉t的鱼苗和鱼种，成鱼也可发生隐性感染称为带毒者。目前已成为�：κ澜绺鞴t养殖的最主要传染病之一。

我国近年已在斑点叉尾鮰鱼苗中分离到 CCV。由于该病毒主要感染斑点叉尾鮰和其他鮰的鱼苗和幼鱼，有很高死亡率，刚孵化鱼苗死亡率可达 100%，因此快速灵敏检测斑点叉尾鮰病毒具有重要意义。

为此本公司开发了斑点叉尾鮰病毒的 PCR 检测试剂盒，

1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增斑点叉尾鮰病毒，与其他病原没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1mL（红盖）
试剂二	超纯水	1mL（亮黄色）
试剂三	斑点叉尾鮰病毒PCR引物混合液	100μL（白盖）
试剂四	斑点叉尾鮰病毒PCR阳性对照（1×10E8 /μL）	50μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂：

样品 DNA。

使用方法：

一、样品 DNA 的制备：

1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提�。ㄒ桓鲅分票秆粜远哉蘸鸵桓鲅分票敢跣远哉�。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 斑点叉尾鮰病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应(40μL 体系)：

3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
斑点叉尾鮰病毒PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR阳性对照（斑点叉尾鮰病毒PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

四、特别提示：

本公司的所有产品，仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

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斑点叉尾鮰病毒PCR试剂盒说明书
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