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    • 犬载脂蛋白A1(APOA1)ELISA试剂盒

      规格:
      价格:
      • 品牌 : 通蔚生物
      • 目录号 : TW-E2164
      • 应用 : 仅限于科研使用
      • 英文名 :Canine APOA1 ELISA KIT
      • 货期 : 现货
      • 灵敏度 :0.31ng/mL
      • 规格 :48T/96T
      • 检测范围 :0.625 ~ 40ng/mL
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    犬载脂蛋白A1(APOA1)ELISA试剂盒
    简介
    载脂蛋白A1是一种蛋白质,由APOA1基因编码。作为高密度脂蛋白颗粒的主要成分,它在脂质代谢中具有特殊作用,APOA1基因位于第11条染色体上,具体位置为 11q23-q24,该基因包含4个外显子。APOA1编码一个28.1kDa的蛋白质,由243个氨基酸组成;通过质谱数据观察到21个肽,载脂蛋白A1是血浆中高密度脂蛋白颗粒的主要蛋白成分,从肠道细胞分泌的乳糜微粒也含有载脂蛋白A1,但它在血液中迅速转移到高密度脂蛋白,该蛋白作为高密度脂蛋白颗粒的一个组成部分,通过接受细胞内的脂肪(包括动脉壁内的巨噬细胞,这些巨噬细胞已被氧化的低密度脂蛋白颗粒摄入的脂肪超载),使脂肪分子外流到其他地方,包括回到低密度脂蛋白颗粒或到肝脏排泄出来,它是卵磷脂胆固醇转移酶(LCAT)的辅助因子,该酶负责大多数血浆胆固醇酯的形成,载脂蛋白A1还被分离为前列环素(PGI2)稳定因子,因此可能有抗凝血作用,它经常被用作预测心血管疾病的生物标志物。
    检测原理
    本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物APOA1,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中APOA1的浓度。
    需要的其他材料
    1.  酶标仪,包含450nm测定波长,同时包含600-680nm校正波长更佳;
    2.  移液器及枪头;
    3.  蒸馏水或去离子水;
    4.  100-1000 mL刻度量筒;
    5.  洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机;
    6.  水平轨道微孔板振荡器,能够保持500±50 rpm的速度;
    7.  用于稀释标准品和样品的试管。
    样品保存
    样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
    试剂准备工作
    使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
    洗涤液/稀释液配置
    如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热?晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)
    标准品配置
    试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从800ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至40ng/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的40ng/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将40ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为:  40ng/mL、 20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。

    犬(APOA1)ELISA试剂盒

    抗体工作液配置
    使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
    酶结合物工作液配置
    使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
    备 注:如待测样本中APOA1浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
    结果的计算
    计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
    若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
    示例数据

    以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

    标准品浓度(ng/mL)

    40

    20

    10

    5

    2.5

    1.25

    0.625

    0

    OD值

    2.433

    1.717

    1.032

    0.613

    0.491

    0.257

    0.123

    0.059

    校正OD值

    2.374

    1.658

    0.973

    0.554

    0.432

    0.198

    0.064

    0


    下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

    犬(APOA1)ELISA试剂盒

    重复性
    板内变异系数小于10%,板间变异系数小于10%。
    灵敏度
    经样本测试,本试剂盒的检测灵敏度为0.31ng/mL。
    特异性
    该试剂盒测定可识别重组犬APOA1。
    其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
    使用ELISA试剂盒之前,请您必须完整阅读说明书,本产品仅供科研使用,不能于临床诊断或治疗。

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