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产志贺氏毒素大肠杆菌(（Shiga toxin-producing Escherichia coli， STEC）是一类能产生志贺氏毒素的大肠杆菌，为革兰氏阴性杆菌，基因组全长为5 Mbp 左右，不同菌株之间可能存在一定差异。产志贺氏毒素大肠杆菌主要通过污染的食物、水或直接接触感染者等途径传播。产志贺氏毒素大肠杆菌可引起人类严重的疾�。绯鲅越岢ρ�、溶血性尿毒综合征等，对人类健康有较大�：Γ虼丝焖偌觳獠竞厥隙舅卮蟪Ω司哂兄匾囊庖�。为此，本公司以探针法qPCR技术为基础开发了产志贺氏毒素大肠杆菌的检测试剂盒，它具有下列特点：
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
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超纯水 |
1mL |
1.5mL蓝盖管 |
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产志贺氏毒素大肠杆菌qPCR引物-探针干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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产志贺氏毒素大肠杆菌qPCR阳性对照(1E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
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使用手册 |
1份 |
1份 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀释标准曲线样品以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
数据处理
1. 如果样本制备阳性对照或PCR阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。
自备试剂
运输及保存
