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金玉兰酶(β-Lactamase)ELISA试剂盒
简介
金玉兰酶是一种被违规用于掩盖牛奶等生鲜乳中抗生素残留的非法添加物，它本质上属于β-内酰胺酶，是β-内酰胺类抗生素的分解剂、解抗剂或隐蔽剂。一些不法分子在生鲜乳中违规添加金玉兰酶（β-内酰胺酶），它与乳中抗生素的β-内酰胺环结合，竞争性抑制，使抗生素作为抗原暂时失活，当利用抗生素检测卡检测牛奶中抗生素时，呈阴性检出，即检测不出抗生素，而抗生素并未完全失活。这使得原本含有因奶牛生病使用抗生素而残留的牛奶，在检测时因该酶可分解β-内酰胺类抗生素而呈现貌似无抗生素残留的假象。
β-内酰胺类抗生素在临床上用于治疗多种细菌感染性疾病。如果人体长期摄入含有金玉兰酶（β-内酰胺酶）的乳制品等食物，当体内出现细菌感染需要使用 β-内酰胺类抗生素进行治疗时，可能会因为之前长期接触该酶使得体内残留有一定的酶活性，从而导致进入体内的 β-内酰胺类抗生素被酶分解破坏，降低其对致病细菌的抑制和杀灭作用，影响治疗效果，使病情难以得到有效控制，甚至可能促使细菌产生耐药性。
本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测样品中的金玉兰酶的含量。
检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中金玉兰酶和微孔条上预包被的偶联抗原竞争金玉兰酶抗体，加入酶标二抗后，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。随后结合的酶催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的金玉兰酶成负相关。通过标准曲线可准确定量样品中金玉兰酶的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释倍数即为实际样品中金玉兰酶的含量。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
试剂准备
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热?晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先将2000ppb标准品（200?L）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至51ppb（例：26?L的标准品母液+974?L的1×稀释液，制备得到1000μL的51ppb浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将51ppb标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为：51ppb、25.5ppb、12.8ppb、6.4ppb、3.2ppb、1.6ppb、0.8ppb，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗工作液稀释成1×一抗工作液，根据所需用量配置。
酶标二抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×酶标二抗稀释成1×酶标抗体工作液，根据所需用量配置。
备 注：如样本中待测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数 (建议：将待测样本用样品稀释液最低稀释1倍，在正式实验之前做预实验，以确定具体稀释倍数) ；标准品母液及100×酶标二抗溶液根据实验所需酶标板孔数吸取一定量配制工作液，剩余溶液应放回-20℃储存，且避免反复冻融。（若实验在1-2周内做完，标准品母液及100×酶标抗体置于2-8℃保存；若实验为长时间跨度实验，建议将标准品母液及100×酶标抗体置于-20℃保存，以保证实验结果的稳定性）
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
精密度
批内精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 CV%小于10%。
批间精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数 CV%小于15%。
回收率
样本回收率：80% - 120%
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.8 ppb。
线性关系
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.998。
本ELISA试剂盒实验计算和曲线图，请您下载产品说明书(供参考），本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断和治疗。
