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维生素B12(Vb12)ELISA试剂盒
简介
维生素B12，也被称为钴胺，是一种参与新陈代谢的水溶性维生素。它是DNA合成、脂肪酸和氨基酸代谢的辅助因子。它在神经系统的正常功能中通过其在髓鞘合成中的作用非常重要，并在骨髓中红细胞的成熟中发挥重要作用。在发达国家，维生素B12缺乏的最常见原因是由于胃内因子（IF）的丧失而导致的吸收障碍，而胃内因子必须与食物来源的B12结合才能吸收。第二个主要原因是与年龄有关的胃酸分泌减少（失水症），因为胃酸暴露会释放与蛋白质结合的维生素。出于同样的原因，长期接受抗酸剂治疗、使用质子泵抑制剂、H2受体阻滞剂或其他抗酸剂的通用种属风险增加。缺乏的特点可能是肢体神经病变或一种叫做恶性贫血的血液疾�。馐且恢志抻紫赴云堆�。体内的叶酸水平可能会影响维生素B12缺乏症的病理变化过程和症状表现。 本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测血浆、血清等样本中的维生素B12的含量。
检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中维生素B12和微孔条上预包被的偶联抗原竞争维生素B12抗体，加入酶标二抗后，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。随后结合的酶催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的维生素B12成负相关。通过标准曲线可准确定量样品中维生素B12的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释倍数即为实际样品中维生素B12的含量。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
试剂准备
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热?晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先将10000ppb标准品（100?L）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至600ppb（例：60?L的标准品母液+940?L的1×稀释液，制备得到1000μL的600 ppb浓度标准品），随后在6个试管中分别加入600μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将600 ppb标准品依次3倍倍比稀释至7个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为：600ppb、200ppb、66.7ppb、22.2ppb、7.41ppb、2.47ppb、0.82ppb，从最高浓度标准品溶液中吸取300μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗工作液稀释成1×一抗工作液，根据所需用量配置。
酶标二抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×酶标二抗稀释成1×酶标抗体工作液，根据所需用量配置。
备 注：如样本中待测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数 (建议：将待测样本用样品稀释液最低稀释1倍，在正式实验之前做预实验，以确定具体稀释倍数) ；标准品母液及100×酶标二抗溶液根据实验所需酶标板孔数吸取一定量配制工作液，剩余溶液应放回-20℃储存，且避免反复冻融。（若实验在1-2周内做完，标准品母液及100×酶标抗体置于2-8℃保存；若实验为长时间跨度实验，建议将标准品母液及100×酶标抗体置于-20℃保存，以保证实验结果的稳定性）
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
精密度
批内精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 CV%小于10%。
批间精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数 CV%小于15%。
回收率
样本回收率：80% - 120%
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.82 ppb。
线性关系
校准品剂量反应曲线相关系数 r 值，大于等于0.9980。
本ELISA试剂盒实验计算和曲线图，请您下载产品说明书(供参考），本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断和治疗。
