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偶氮玉红(Arb)ELISA试剂盒
简介
偶氮玉红（Azorubine），又名酸性红，为人工合成色素，通过重氮化4-氨基萘磺酸和4-羟基萘磺酸之间的偶合反应合成，大量食用合成色素后，对人身体健康会造成潜在�：�。食品添加剂使用标准《GB2760-2014》规定偶氮玉红可用于冷冻饮品，如可可制品、巧克力和巧克力制品（包括代可可脂巧克力及制品）以及糖果，还有焙烤食品馅料及表面用挂浆（仅限饼干夹心），然而某 些不法分子为增加产品色泽，在食品中超范围或非法添加偶氮玉红，对人们的健康造成�：�。目前国家尚未发布食品中偶氮玉红的检测方法，国内对食品中偶氮玉红的检测也鲜有报道。敏感人群和哮喘病患者会对它出现过敏反应。代表性产品是糖果、蛋白杏仁糖、果冻。瑞典、美国、奥地利和挪威禁止其用于食品加工。本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测血清、组织及辣椒粉等样品中偶氮玉红的残留量。
检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中偶氮玉红和微孔条上预包被的偶联抗原竞争偶氮玉红抗体，加入酶标二抗后，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。随后结合的酶催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的偶氮玉红成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中偶氮玉红的含量。
需要的其他材料
1. 酶标仪，450nm/630nm；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 恒温培养箱；
7. 振荡器；
8. 天平（感量0.01g）；
9. 用于稀释标准品和样品的试管；
10. 50mL离心管。
试剂准备
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热?晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先将3000ppb标准品（200?L）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至146ppb（例：49?L的标准品母液+951?L的1×稀释液，制备得到1000μL的146ppb浓度标准品），随后在6个试管中分别加入600μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中146ppb标准品依次3倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为：146ppb、48.6 ppb、16.2ppb、5.4ppb、1.8ppb、0.6ppb、0.2ppb，从最高浓度标准品溶液中吸取300μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗工作液稀释成1×一抗工作液，根据所需用量配置。
酶标二抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×酶标二抗稀释成1×酶标抗体工作液，根据所需用量配置。
备 注：如样本中待测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数 (建议：将待测样本用样品稀释液最低稀释1倍，在正式实验之前做预实验，以确定具体稀释倍数) ；标准品母液及100×酶标二抗溶液根据实验所需酶标板孔数吸取一定量配制工作液，剩余溶液应放回-20℃储存，且避免反复冻融。（若实验在1-2周内做完，标准品母液及100×酶标抗体置于2-8℃保存；若实验为长时间跨度实验，建议将标准品母液及100×酶标抗体置于-20℃保存，以保证实验结果的稳定性）
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
精密度
批内精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 CV%小于10%。
批间精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数 CV%小于15%。
回收率
样本回收率：80% - 120%
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.2 ppb。
线性关系
校准品剂量反应曲线相关系数 r 值，大于等于0.998。
本ELISA试剂盒实验计算和曲线图，请您下载产品说明书(供参考），本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断和治疗。
