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Elisa试剂盒故障排除

发布时间：2024-07-24     发布作者：上海金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting生物

  在做ELISA实验过程，难免会遇到故障，这些故障将会影响实验进展及结果。了解ELISA实验故障有助于发现问题，及时解决。下面由上海金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting生物从ELISA试剂盒实验过程整理一些常见的移液、高背景、信号弱或无信号和实验结果超出预设的标准范围方面介绍。

  移液问题


  ELISA移液操作是整个实验的关键步骤之一，它直接影响实验结果的准确性和可靠性。通常移液过程会遇到一些问题及解决办法，如下表格：




常见问题


  • 使用不匹配的吸头和移液器。
  • 不戴手套直接处理吸头。
  • 多通道移液器吸头连接不均匀。




解决方案


  • 务必使用移液器制造商推荐的吸头，尤其是对于小容量移液器。
  • 处理吸头时务必佩戴塑料手套以防止污染。




减少错误


  • 确保所有吸头均牢固地安装在多通道移液器上。
  • 目视检查体积以尽量减少移液错误。
  • 彻底清洗后才能回收吸头，并及时丢弃任何损坏的吸头，尤其是与酶结合物一起使用的吸头。



熟练使用


  • 适当的移液技术培训对于保持 ELISA 检测的准确性和一致性至关重要，从而获得可靠的结果。



  高背景

  ELISA高背景是一个常见问题，会影响实验结果的准确性和可靠性。通常ELISA高背景遇到一些问题及解决办法，如下表格：




强烈或长时间的结合反应




  • 确保按照说明书的稀释度使用结合物，并用终止缓冲液及时终止反应。




过旧的底物或终止溶液



  • 使用新鲜的底物和终止液。终止液应清澈，而不是黄色。


反应未停止



  • 停止反应以防止继续显色。




延迟读板




  • 加入终止液后立即读板，以避免进一步显色。




受污染的玻璃器皿或塑料




  • 使用干净、消毒过的玻璃器皿和新鲜的塑料以防止污染。




孵化温度不正确




  • 在正确的温度下进行孵化，并验证孵化器是否正确设置并正常运行。




非特异性抗体结合




  • 包括使用合适封闭缓冲液的封闭步骤，例如来自与二抗相同物种的 5-10% 血清或牛血清。确�？拙ご硪苑乐狗翘匾煨愿阶�。




清洗或阻塞不充分




  • 增加洗涤次数和持续时间。使用 BSA、酪蛋白或明胶等蛋白质阻断剂来防止非特异性结合。在洗涤缓冲液中添加 Tween-20 等洗涤剂。




高抗体浓度




  • 降低一抗或二抗的浓度。如有必要，进行滴定。




底物溶液的过早制备




  • 将底物溶液立即混合，然后加入到板中。




受污染的储液器、板密封剂、移液器吸头或缓冲液



  • 每一步均使用干净的器皿并准备新鲜缓冲液，以避免 HRP 污染。



  信号弱或无信号


  ELISA实验中出现信号弱或无信号是一个常见问题，会影响实验结果的准确性和可靠性。造成这个问题的原因有很多，以下是常见的原因以及解决方法，如下表格：



试剂处理


  • 按按照说明书以正确的顺序添加试剂。
  • 严格按照试剂说明书的要求进行稀释并根据需要重复实验。



抗体浓度



  • 如果抗体浓度太低，则增加一抗或二抗浓度。
  • 为获得更佳效果，请在 4°C 下孵育过夜。考虑使用抗体浓缩试剂盒。




抗体相容性


  • 确保一抗和二抗兼容且物种匹配。
  • 对于粘附性较差的情况，请使用经 ELISA 验证的板并将涂层时间延长至 4°C 过夜。




夹心 ELISA



  • 确认捕获和检测抗体针对不同的表位。
  • 如果需要，请使用不同的抗体对或考虑其他 ELISA 类型。




标准与样品


  • 确保标准品正确制备。如果标准品过期或降解，请使用新的小瓶。
  • 如果样本不在可检测范围内，则进行连续稀释并加入样本以检查是否存在干扰。




缓冲区注意事项




  • 确保缓冲液不含叠氮化物或充分清洗以避免抑制 HRP 活性。



  实验结果超出预设的标准范围


  实验结果与预期值之间存在显著差异，超出了预先设定的正常范围，造成这个问题的原因有很多，以下是常见的原因以及解决方法，如下表格：



确定问题


  • 样本中可能不含有分析物，或者分析物的含量低于可检测水平。
  • 分析物浓度可能高于最高标准点。




低分析物浓度的解决方案


  • 使用更高的样本量来提高检测效果。
  • 寻求适合的协议修改的建议。




高分析物浓度的解决方案




  • 稀释样品并重新分析，以使其处于检测的范围内。



  上述为大家盘点ELISA实验过程遇到的一些问题，希望这些问题可以作为参考，提高elisa实验的准确性。上海金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting也为大家提供代测服务，如果你想代测或遇到问题欢迎前来咨询。
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