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酶联免疫吸附实验：ELISA 样本处理

发布时间：2024-08-16     发布作者：上海金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting生物

  在ELISA中，记录对于跟踪验证步骤和确保整个过程的一致性至关重要。正确标记样品和试剂对于避免混淆至关重要。使用经过校准的移液器进行精确测量有助于最大限度地减少ELISA测定中常见的变异性和移液错误。优化试剂浓度并遵守方案可提高测定性能和可重复性。例如，保持适当的孵育时间和室温条件对于获得可靠的结果是必要的。

  适当的样本制备非常重要，因为它会影响ELISA测试的准确性和可靠性。此过程包括减少干扰、保持样本完整以及为测试创造最佳条件的步骤。为了安全起见，根据材料的传染性程度，需要不同级别的防护。基本的防护服有助于防止样本污染和错误结果。必备的安全装备包括实验室工作服、手套、护目镜，有时还包括通风橱。

样品的存储：

1.避免污染：遵循制造商的指导来存储样品。

2.标签和密封： 确保样品正确标记和密封，以防止干燥或蒸发。

3.及时分析：尽快分析样本以获得准确的结果。

样品采集：

1.遵守规则： 遵守样本采集的法律准则。

2.告知客户： 让客户知道需要多少样品。

3.反映状况：确保结果准确反映收到的样本的状况。

样品制备：

1.遵循说明：遵循测试套件的说明来混合和提取分析物。

2.使用适当的设备： 确保所有设备合适且维护良好。

3.时间：分析前准备样品或按指示储存。

使用冷冻样品：

1.解冻： 根据分析物的稳定性，在 4°C 或室温下完全解冻样品。

2.混合：彻底混合液体样品，不要产生泡沫。

3.避免反复冷冻： 将样品分装于-20°C 下保存，以避免多次冻融循环并保持样品质量。

  资源优化：

  为了提高效率，有效管理分析板、洗涤缓冲液和试剂等资源至关重要。使用可靠的洗板机并遵守洗涤步骤的规程可以显著减少背景信号并提高灵敏度。定期进行数据分析可确保分析性能符合预期标准，尤其是在处理低分析物浓度时。

细胞培养上清液：

1.离心： 在 4°C 下以 1,500 rpm 的速度旋转培养基 10 分钟。

2.储存： 分装并将上清液储存于 -80°C。避免反复冻融。

细胞提取物：

1.准备：将组织培养板放在冰上，并用冰冷的 PBS 清洗细胞。

2.提�。好� 100 毫米平板添加 0.5 毫升提取缓冲液，刮下细胞，收集在冷却的试管中，短暂涡旋，并在冰上孵育 15-30 分钟。

3.离心： 4°C 下以 13,000 rpm 旋转 10 分钟。

4.储存：分装上清液并储存于 -80°C。避免反复冻融。

条件培养基：

1.培养细胞：使用含血清的培养基直至细胞达到所需的汇合度。

2.准备培养基： 用温热的 PBS 清洗，添加无血清培养基，孵育 1-2 天。

3.离心： 在 4°C 下以 1,500 rpm 的速度旋转培养基 10 分钟。

4.储存：分装并将上清液储存于 -80°C。避免反复冻融。

牛奶、尿液、唾液：

1.离心： 4°C 下以 10,000 xg 旋转 2 分钟。

2.储存：分装上清液并储存于 -80°C。避免反复冻融。

等离子体：

1.收集血液： 使用抗凝管，在 4°C 下以 3,000 rpm 离心 10 分钟。

2.储存：分装上清液（血浆）并储存在 -80°C 下。避免反复冻融。

血清：

1.收集血液：使用未经处理的试管，在室温下孵育 20 分钟。

2.离心： 4°C 下以 3,000 rpm 旋转 10 分钟。

3.储存：分装上清液（血清）并储存在 -80°C 下。避免反复冻融。

组织提取物：

1.解剖组织： 在冰上操作，在液氮中快速冷冻。

2.提�。� 每~5 mg 组织添加~300 ?L 提取缓冲液，均质化，然后冲洗刀片。

3.搅拌：在 4°C 下混合 2 小时，然后在 4°C 下以 13,000 rpm 离心 20 分钟。

4.储存：分装上清液并储存于 -80°C。避免反复冻融。

一般建议：

1.蛋白质浓度： 目标浓度为≥1-2 mg/mL。

2.稀释： 用结合缓冲液将血清、血浆、细胞和组织提取物稀释 50%。

3.离心解冻样品：使用前在 4°C 下以 10,000 rpm 旋转 5 分钟。

  试剂制备和质量控制：正确的试剂制备和验证是实现可靠检测性能的关键。一致的试剂标签和控制以及跟踪使用和存储有助于提高ELISA程序的整体可靠性。实施严格的质量控制可确保准确测量分析物浓度并确保结果可重复。t使用前在4°C下以10,000rpm转速旋转5分钟。

存储期限限制:

2-8°C：适合最多5天。

-20°C：适合长达6个月。

-80°C：可保存长达 2 年

液氮：适合通过适当的方法无限期保存。

避免反复冻融循环:

1.将样品分成更小的等份以减少多次冻融循环的需要。

2.在15-25°C水浴中快速解冻样品并立即使用。

3.如果要重新冷冻，请在解冻后立即进行，以尽量减少样品的降解。

套件的存储:

1.储存于 2-8°C 干燥处；避免冷冻组件。

2.遵守标签上的有效期。

3.防止试剂盒冻结以避免损坏和无效结果。

先进先出:

1.优先使用有效期最短的套件。

2.请注意工具盒上的首次使用日期，以防止混淆。

预热：

1.使用前将所有试剂恢复至室温（20-25°C）。

2.使用后应立即将组件放回储存条件。

未使用组件的存储：

1.将未使用的微量滴定板存放在装有干燥剂的可重新密封的袋中。

2.将所有组件直立并安全关闭地存放。

  样品处理

  在Elisa样本处理中，离心用于去除细胞成分和碎片，这对于获得干净的上清液非常重要。
  通过深度或膜过滤方法去除残留颗粒，进一步清洁样品。此步骤可确保样品不含任何可能影响测试结果的污染物。
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