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品质保证 · 金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting试剂
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发布时间：2023-12-28 发布作者：上海金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting生物
酶联免疫吸附测定 ( ELISA ) 是现有的最灵敏和可重复性最高的技术之一。这些测定快速、易于执行且易于自动化。与任何检测一样，ELISA 的重现性和可靠性取决于正确的技术和对细节的关注。
ELISA技术分为：
直接 ELISA，其中抗原固定在 ELISA 板上，一抗带有标记（图 1 A）
间接 ELISA，其中抗原固定在 ELISA 板上，二抗带有标记（图 1 B）
三明治 ELISA，其中两个一抗（用于捕获和检测）嵌入抗原，形成“三明治”，然后复合物被二抗标记抗体识别（图 1 C）。
图 1. ELISA 格式的类型：A) 直接、B) 间接和 C) 夹心 ELISA。
匹配对是指已知可识别同一蛋白质抗原上不同表位的抗体组，因此它们可以一起用于夹心 ELISA 中捕获和检测单个抗原。ELISA 测定中使用的抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体或两者的组合。
单克隆抗体可用于所有类型 ELISA 中所有含抗体的步骤。它们通常在夹心 ELISA 中成组使用，但也可与多克隆抗体结合用于捕获或检测，以增强信号或提供更大的从复杂溶液中捕获抗原的机会。
由于多克隆抗体溶液中抗体的异质性和表位的广泛代表性，多克隆抗体可以成为检测抗原的强大工具，通常比单克隆抗体产生更高的信号水平。然而，多克隆抗体更有可能与密切相关的蛋白质共享一个或多个表位，从而导致更高的非特异性信号。减少该问题的一种方法是使用亲和纯化或交叉吸收的多克隆抗体。为了提高测定灵敏度，可以将 ELISA 的检测方法从直接检测转换为使用多克隆抗体的间接检测。
ELISA 可以测试多种样品，测定条件的选择将取决于样品的复杂性和预期存在的抗原量。
重要的是要结合已知标准对所有样品进行一式两份或三次测试，以确保结果和定量的准确性。
最好测试样品的几种稀释度，以确保最终结果落在标准曲线的线性部分内。高度浓缩的样品可能会低估浓度，而高度稀释的样品可能会高估浓度。
通常需要进行封闭，以防止检测抗体与多孔板表面本身的非特异性结合。当板完全封闭时，由于非特异性信号将减少，因此测定灵敏度将增强。
彻底的清洗程序对于获得可靠的 ELISA 结果至关重要。重要的是通过轻轻地将吸液头放入底部来完全吸出所有孔中的液体。避免划伤孔的内部。清洗完成后，建议将板倒置并在吸水纸上擦干。
捕获抗体浓度
在包被缓冲液中制备不同浓度的捕获抗体。
阻塞缓冲区
准备不同的封闭液。如果封闭液未预先配制（即，它是单一蛋白质，例如 BSA），请尝试不同浓度的蛋白质。
标准稀释液
尽量使标准稀释剂与样品基质尽可能匹配。
如果基质本身不能精确复制，则测试不同的标准稀释溶液并检查样品的标准曲线和稀释线性。可能需要选择不同的稀释剂。
如果样品的线性度较差，则样品基质和标准稀释剂之间可能存在不平衡。在这种情况下，应进行加标回收或稀释线性实验。
样品浓度
准备不同浓度的样品，同时牢记底物的检测限。为了确认生物样品基质不会掩盖或增强信号，应进行加标和回收以及稀释线性实验。
检测抗体浓度
制备不同浓度的检测抗体。
酶结合物浓度
根据底物描述的 ELISA 试剂盒范围制备不同浓度的酶缀合物。
信号检测