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酶联免疫试剂盒常见5种实验检测方法

发布时间：2024-07-23     发布作者：上海金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting生物

  酶联免疫试剂盒也叫“elisa试剂盒”，它是一种检测生物样本中抗原存在的技术。与其他类型的免疫测定一样，ELISA检测技术依靠抗体通过高度特异性的抗体-抗原相互作用来检测目标抗原。ELISA主要有四种类型：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA和竞争性ELISA。每种方法在酶联免疫试剂盒都有其独特的优点、缺点和适用性。下面为大家详细介绍。


  酶联免疫试剂盒检测类型


  直接ELISA法


  1971年，EvaEngvall和PeterPerlmann开发了一种革命性的免疫检测方法，称为酶联免疫吸附测定（ELISA）。ELISA利用抗体识别和结合特定抗原，从而检测激素、病毒、细菌和其他生物分子的存在。直接ELISA是一种简单的ELISA类型，它直接将抗原或抗体固定在固相载体上，并使用标记的抗体或抗原进行检测。


  该方法能有效检测较大的抗原，直接将抗体或抗原包被在酶标板上，用酶联抗体或抗原进行检测。孵育后，未结合的抗原或抗体都会被洗掉。加入底物以产生可见信号，通常是颜色变化。测量该信号的强度以确定存在的抗原或抗体的量。


优点：
  • 由于仅使用一种抗体，因此过程更快，步骤更少。
  • 与使用二抗的方法相比，减少了交叉反应。
缺点：
  • 标记每个一抗既昂贵又费时。
  • 标记可能会影响抗体的有效性。有些抗体无法标记。实验中标记一抗的灵活性有限，导致信号放大最小。


  间接ELISA：


  1978年，Lindstr?m,P等人在直接ELISA的启发下，开发了间接ELISA技术，用于测量猪IgG。间接ELISA是临床诊断的关键。它可以检测血液中的抗体，显示过去是否接触过莱姆病、艾滋病毒和禽流感等疾病。


  在间接ELISA中，使用二抗代替一抗来检测和分离抗原。在孵育过程中，如果血清中存在针对抗原的抗体，则会形成抗原抗体复合物。为了使这些复合物可视化，需要添加标记有与一抗特异性结合的酶的二抗。间接ELISA广泛用于内分泌学中以寻找抗原。


优点：
  • 允许使用单个抗物种结合物测试针对特定抗原的多种抗血清。
  • 广泛应用于诊断，尤其是筛查大量样本。
  • 通过二抗增强信号放大。
缺点：
  • 可能与二抗发生交叉反应，从而产生非特异性信号。
  • 该过程中需要额外的孵化步骤。



  夹心ELISA：


  1977年，Kato,K等人上发表了关于夹心ELISA的研究。夹心ELISA可识别不同菌株的病原体，在病原体或抗原有限时很有用。


  微孔板孔被捕获抗体包被并封闭以防止非特异性结合。然后加入含有抗原的样品。将板孵育以使抗原能够与捕获抗体结合。孵育后，清洗可去除未结合的抗原，仅留下附着的特定抗原。添加并孵育针对结合抗原的特异性酶标记抗体，与捕获抗体形成“三明治”。再进行一次清洗，去除未结合的酶标记抗体。添加底物，与酶发生反应，产生颜色变化。显色表示阳性结果，表明酶活性和抗原存在。无色表示阴性结果，表示没有抗原。目标抗原“夹在”两种抗体之间，因此该方法得名“夹心ELISA”。这种方法比其他类型的ELISA灵敏度高2-5倍。


优点：
  • 该方法可以快速准确地检测样本中的抗原浓度，无需先纯化抗原。
  • 它对于在流行病期间识别微生物或病原体的菌株很有用，特别是在抗原水平较低或存在许多其他蛋白质时。
缺点：
  • 它要求抗原至少具有两个抗体结合位点，因为需要两个抗体来形成夹层。
  • 该技术只能测量多价抗原，如蛋白质或多糖。



  竞争ELISA


  Yorde,Donald等人1976年开发了这种方法。当测量的抗原很小并且只有一个抗体结合位点时，使用竞争性测定。孔中涂有抗原特异性抗体或抗体特异性抗原。将样本和酶标记的抗原或抗体加在一起。


  标记分子和未标记分子竞争结合到孔中。洗去未结合的分子后，加入酶底物，引起颜色变化。颜色强度与分析物浓度成反比：抗原或抗体浓度低时吸光度高，而浓度高时吸光度低。


优点：
  • 主要的优点是，一抗无需纯化即可使用。
缺点：
  • 在竞争性 ELISA 中，随着原始抗原浓度的增加，信号会变弱。
  • 发生这种情况的原因是，样本中的抗原水平越高，意味着留在孔中的标记抗原越少，从而导致信号越弱。


  多重ELISA


多重免疫测定法对于研究疾病变化非常有用，有助于监测和改善治疗。多重ELISA扩展了夹心ELISA，可在单个微量滴定板内检测抗原或样本上的多个表位。这一进步类似于蛋白质阵列格式，可在一个孔中同时检测多种抗原。


优点：
  • 它们可实现高通量分析，每个孔最多可进行 25 次分析。
  • 它们需要的样本量较少。
  • 在时间和成本方面都很高效。
  • 它们允许对分子水平以及其他多个水平进行评估。
  • 它们能够可靠地检测多种浓度范围内的各种蛋白质。
缺点：
  • 需要熟练的专业知识才能正确执行。
  • 多重检测可以检测样品或检测溶液中多个抗体和抗原之间的相互作用。



上述为大家介绍ELISA试剂盒检测类型，了解这些检测方法，可以在实验中结合优缺点选择适合自己实验检测方法提高实验准确性。

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