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品质保证 · 通蔚试剂
021-54845833/15800441009品质保证 · 通蔚试剂
发布时间：2024-03-08 发布作者：上海通蔚生物
在基本的细胞培养操作中，为了防止污染并安全地进行实验，您应该做一些事情，不应该做一些事情。不仅包括适用于其他研究领域的一般事项，还包括细胞培养的具体预防措施。在本文的前半部分，我们将解释细胞培养基本操作的注意事项。正确管理实验环境和储存材料不仅对您自己的研究很重要，而且还能避免打扰其他实验室成员。请仔细阅读并用于您的实验。
我们还将在本文后面讨论细胞培养中的无菌技术。我们整理了您需要采取的预防措施清单，以防止细菌、真菌、支原体等引起的交叉污染，请也参考一下。
首先，我们来检查一下实验者本人的着装。始终遵循安全标准以在实验室中保护自己。需要个人防护装备（实验室外套、实验室手套、安全眼镜）。特别是，在处理液氮时，请务必遵守各实验室制定的规定，例如使用特殊的绝缘手套、全脸面罩、防溅围裙和手套。另外，为了防止头发污染，最好将长发扎起来或戴上帽子。
为避免空气传播细菌，请将正常实验和组织培养的实验服和鞋分开，并避免污染培养室环境。通过穿着不同颜色的夹克或实验室外套更容易区分它们。
接下来说一下实验环境的准备。始终保持超净工作台、工作台以及其他处理细胞的区域周围区域的清洁。避免将纸板等包装物放置在进行细胞培养的区域。请务必定期检查和清洁培养箱、超净工作台、离心机、显微镜等，保持清洁。
所有使用的材料，如试剂、烧瓶和培养基，都应贴上标签或标明日期和内容，以明确里面的内容。另外，使用前请务必检查所用培养基和试剂的质量。每天检查培养基是否有细菌或真菌污染的迹象。即使您购买了市售的培养基，也请务必进行此项检查。
所有与细胞直接接触的培养箱、培养设备、培养基等必须无菌，防止微生物污染。因此，所有使用过的物品都必须进行灭菌或消毒。
一般用于消毒的酒精有效浓度为乙醇70%左右，异丙醇60-70%左右，通过脱水凝固进行消毒。乙醇对大多数病毒有效（不适用于没有外壳的病毒），异丙醇对病毒无效。
灭菌主要有三种：高压灭菌、干热灭菌和过滤灭菌。
接下来，在实际操作过程中，还有一些需要注意的地方。尝试一次仅使用一种类型的细胞系。这降低了交叉污染和错误标签的风险。此外，如果超净工作台中发生细菌或支原体的气溶胶传播，受影响的瓶子和烧瓶也会减少。
在操作之间使用合适的消毒剂（例如70%乙醇）对工作表面进行消毒，并在处理不同细胞系之间等待至少15分钟。培养过程中，每个细胞系的培养基瓶尽可能远离。应定期检测细胞是否有支原体感染。
培养细胞时应避免的事项是：
首先，尽可能避免在培养基中连续添加抗生素。抗生素抗药性细菌更有可能出现，污染也变得更难以识别。然后，每次处理废物，避免在培养箱或超净工作台中留下任何废物。
确保不要太多人同时进入实验室也很重要，以避免细菌污染空气。此外，来源不明的细胞不应在主细胞培养室中处理。隔离处理这些细胞，直到完成质量控制检查。
培养的细胞达到100%汇合也是不希望的。避免让细胞培养达到100%汇合（汇合：细胞覆盖培养容器的表面）。始终以70-80%汇合度或根据细胞随附的数据表进行培养。
最后，避免使用过期的培养基。培养基的使用期限通常约为4至6个月（如果保存在4°C且含有谷氨酰胺和血清）。
接下来，我们将解释防止细菌、真菌、支原体等交叉污染的标准预防措施。每个实验室都有自己独特的程序，因此请参阅每个实验室的协议以了解详细信息。
70%(v/v)乙醇
甲酚皂溶液
合适的消毒剂
进行任何工作之前，请用甲酚皂彻底洗手。
使用70%乙醇彻底擦拭超净工作台。
用70%乙醇喷洒实验室手套并将它们摩擦在一起。
开始工作前，将所有材料和设备放置在洁净的工作台上。用70%乙醇擦拭洁净工作台设备和细胞培养用设备（中瓶、移液器等）。
在超净工作台内工作时，避免触摸工作台内以外的任何物体（尤其是脸部和头发）。如果发生接触，请用70%乙醇喷洒手套并彻底擦洗。
在超净工作台上慢慢地工作，不要着急。通过慢慢地这样做，您可以使超净工作台内的空气流通。
洁净工作台前严禁说话、打喷嚏、咳嗽。
丢弃用于培养的实验室手套，以防止污染。
所有设备和试剂在从超净工作台上移出之前均经过灭菌。用70%乙醇擦拭工作表面。
将用吸引器吸出的培养基收集到装有灭菌溶液的收集器中，并收集其他设备和溶液，在高压灭菌器中灭菌，然后清洗或处理。
定期用消毒剂清洁超净工作台内部或遵循制造商的说明。
以上，我们解释了细胞培养时的注意事项以及细胞培养前的无菌操作。培养细胞时需要注意的事项有很多，可能看起来很难上手，但如果遵循基础知识，其实并没有那么困难。仔细进行实验，检查每项操作和需要记住的要点。