elisa试剂盒是用来干什么的?ELISA试剂盒，又称酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）。ELISA是一种比较常用的实验室技术，用于检测和定量分析生物样本中的蛋白质和其他分子。它在科研、医疗、生物学和食品安全领域使用比较广泛，你知道它们的原理和实验步骤吗？上海通蔚带您详细了解一下。
ELISA实验原理
ELISA测定法通常在96或384微孔板中进行。这些板被设计成通常通过直接吸附到微量滴定板的表面上或间接地通过预先包被的抗体间接地结合和固定抗原。固定后，将一抗引入样品中，与抗原形成免疫复合物。一抗可以共价标记到酶（例如HRP）上，或者如果一抗被生物素标记，则一抗本身可以使用酶标记的二级抗体或链霉亲和素偶联物间接检测。通过与合适的底物孵育来评估共轭酶的活性，从而实现检测，该底物会产生可测量的副产物。
Elisa检测类分为4种类型，有直接elisa法、间接elisa法、夹心elisa法和竞争elisa法。具体使用哪种方法可以结合自己可用的抗体、所需的结果或样品的复杂性进行调整。上述四种类型大家可以参考此篇文章《
elisa试剂盒有哪几种类型？elisa四类型图解》。
图1 elisa实验
ELISA实验步骤
在进行elisa实验之前，要进行充分的实验准备，在实验前咨询阅读说明书，了解实验注意事项。其次，需要准备实验所需的试剂和设备，如酶标板、抗体溶液、抗原溶液、洗涤液、酶标底物等。
第一步、抗原包被
将抗原溶液加入酶标板中，使其在酶标板上形成一层薄薄的膜层。抗原包被的浓度和时间对实验结果有很大影响，需要仔细控制。
第二步、洗涤
洗涤是ELISA实验中非常重要的一步，它可以去除未结合的抗原和抗体，减少背景噪音。洗涤时要保证酶标板充分摇动，确保每个孔都能清洗干净。
第三步、加样
将样本和抗体溶液加入酶标板中，让它们与抗原结合。加样时要保证每个孔的体积相同，避免出现误差。
第四步、孵育
让抗原和抗体在一定温度下孵育一定时间，以便它们充分结合。孵育时间需要根据实验的具体情况而定，一般需要在37℃下进行1-2小时。
第五步、洗涤
孵育结束后，再次进行洗涤，去除未结合的抗体和抗原。洗涤时要保证每个孔都能清洗干净，避免交叉污染。
第六步、加酶标物
将酶标物加入酶标板中，让它与抗体结合。加酶标物时要保证每个孔的体积相同，避免出现误差。
第七步、显色
在酶的作用下，底物被氧化并释放出色素，形成明显的颜色变化。显色时间需要根据实验的具体情况而定，一般需要在室温下进行30分钟以上。
第八步、终止反应
当颜色变化达到最大程度时，需要加入终止液，停止酶的活性，防止底物过度反应。
第九步、检测结果
通过酶标仪检测各孔的光密度值，计算出抗原或抗体的浓度。在检测结果分析时，需要考虑到实验的特异性、灵敏度、重复性和准确性等方面。
图2.ELISA实验步骤图
ELISA应用领域
ELISA 测试有多种应用，例如食品工业、疫苗开发、免疫学、诊断、毒理学、药物监测、制药工业和移植。
食品工业
ELISA 在食品工业中发挥着重要作用。它是识别食物过敏原（例如牛奶、花生、核桃、杏仁和鸡蛋中的过敏原）的主要平台。 ELISA 还可用于证实食品的真实性。该技术对于避免冒充替代可能造成的经济损失有很大帮助。
疫苗开发
疫苗开发是 ELISA 的一个非常重要的应用，它是 ELISA 过程的一个很好的候选者。可以测试来自免疫动物或人类模型的血清样本，以检测是否存在针对故意注射到宿主体内的某些类型抗原的抗体。
免疫学
身体的防御者，免疫系统，可以以细胞或体液（先天或适应性）模式运作。测量和监测免疫反应的变化是了解免疫疾病的基础。各种研究已证明 ELISA 是此类测量和监测的金标准方法，该方法快速且经济高效。
体液免疫
ELISA 在研究免疫系统对不同类别感染的体液反应方面也显示出巨大的潜力。体液免疫反应涉及体液中存在的物质（抗体和其他成分）。对这些组件的监控和测量非常重要。
诊断
在诊断领域，ELISA 已被证明是一个在全球范围内应用的强大平台，可用于检测人类和动物的多种疾病类型。市场上有许多不同的商业 ELISA 试剂盒可用于检测 HIV、流感、登革热、埃博拉、恰加斯病、利什曼病、莱姆病、西尼罗河病毒等。即使在植物病理学中，ELISA 技术也越来越受到关注。 ELISA 成功克服了以前在植物诊断中进行的血清学分析的缺点
怀孕测试
许多不同的生物分子实体，包括人绒毛膜促性腺激素（hCG）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌三醇（E3）和促甲状腺激素（TSH）可以因怀孕而表达。 ELISA 可以在妊娠早期从母体血液、唾液或尿液中检测到其中一些蛋白质。 HCG 是常见的激素之一，可在受精后第一个月通过 ELISA 检测到。另一种与妊娠相关的生物分子是雌三醇 (E3)，可在妊娠第 6 周时通过唾液中的 ELISA 检测到。
癌症检测
高度灵敏的癌症检测提供了早期诊断，这对于患者的生存至关重要。然而，癌症生物标志物是作为目标分析物最具挑战性的生物分子实体之一。 ELISA 技术的进步有望应用于癌症生物标志物的检测。
ELISA优势和局限性
1.优势：
（1）灵敏度高：ELISA试剂盒的检测灵敏度较高，能够检测出低浓度的抗原或抗体。
（2）特异性好：由于采用了抗原-抗体反应的原理，ELISA试剂盒具有很好的特异性，能够区分不同抗原或抗体的差异。
（3）操作简便：ELISA试剂盒的操作相对简单，易于标准化和自动化。
（4）适用范围广：ELISA试剂盒可以用于各种不同样品类型的检测，如血清、血浆、尿液、细胞培养上清液等。
2.局限性：
（1）假阳性问题：由于抗原-抗体反应的交叉反应性，ELISA试剂盒有时会出现假阳性结果。
（2）非特异性结合：样品中的非特异性物质可能与抗体或抗原发生结合，导致检测结果的不准确。
（3）不同样品间的差异：不同样品来源的抗原或抗体可能存在差异，影响ELISA试剂盒的检测结果。
上述是通蔚为大家介绍了elisa试剂盒是用来干什么的，了解elisa原理、步骤及应用。相信你对ELISA试剂盒有所了解，ELISA试剂盒应用比较广泛及自身优势成为实验室主流检测技术。上海通蔚生物是一家科研和销售科学试剂产品，有人elisa试剂盒、动植物elisa试剂盒，如果想进一步了解elisa试剂盒，欢迎前来咨询我们在线顾问。
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