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品质保证 · 通蔚试剂
021-54845833/15800441009品质保证 · 通蔚试剂
发布时间：2025-07-23 发布作者：上海通蔚生物
酶联免疫吸附实验（ELISA）是一种用途广泛且应用广泛的生化技术，用于检测和定量特定分子，例如蛋白质、肽、抗体和小分子。不同类型ELISA—直接法、间接法、夹心法和竞争法提供了针对各种研究、诊断和临床应用的独特方法。接下来上海通蔚生物为大家介绍每种类型的ELISA及其独特的优势、注意事项和应用。
在直接ELISA中，抗原直接固定在微孔板表面，接着加入针对该抗原的标记酶标抗体，该抗体直接与抗原结合。直接ELISA法相对简单快捷，其灵敏度低于其它方法。
优点：
操作步骤简单、直接
无需二抗，避免交互反应
缺点：灵敏度较低
抗体成本高
应用：直接ELISA可用于筛选生物样本中的抗原，定量可直接与抗体结合而不受干扰的抗原，并由于其简单性和快速的周转时间而用于快速诊断测试。
在间接ELISA中，抗原直接固定在微孔板表面，加入针对该抗原的未标记一抗，然后加入与一抗结合的标记二抗。间接ELISA法可以放大信号，提高灵敏度。
优点：放大信号
林敏度高
可以检测多种抗原
缺点：步骤复杂
非特异性结合风险增加
应用：间接ELISA可以检测和量化血清或其他生物液体中的抗体，筛选大量样本的抗体反应（例如，在血清学调查中），并在疫苗开发和免疫反应研究中确定抗体滴度。
夹心ELISA法是将针对目标抗原的特异性捕获抗体固定在微量滴定板上。加入含抗原的样品，如果存在抗原，则该抗原会与捕获抗体结合。然后，加入针对该抗原不同表位的、带酶标记的特异性检测抗体，与抗原形成“夹心”结构。之后直接加入底物，即可通过显色进行检测。”
优点：高特异性和灵敏性
不容易受到特异性结合的干扰
适用于检测复杂生物样本中的抗原
缺点：
需要两种能够识别抗原上不同表位的特异性抗体。
由于需要配对抗体，技术要求更高，且成本可能较高。
应用：夹心ELISA的应用示例包括量化复杂生物样本（例如血清、组织裂解物）中的特定抗原、检测疾病诊断中的生物标志物（例如检测肿瘤标志物、细胞因子）以及监测研究和临床环境中的蛋白质表达水平。
将特异性的捕获抗体预先包被在微量滴定板上。然后，将含有未知量抗原的样品与已知量的标记抗原（与酶偶联）混合后，一同加入到孔中。样品中的抗原和标记抗原会竞争与板上有限的捕获抗体结合。样品中的抗原越多，能结合到板上的标记抗原就越少，因此最终的显色信号就越弱。信号强度与样品抗原的浓度成反比。竞争性ELISA适用于定量小分子或检测抑制剂。
优点：
适用于检测小分子或抑制剂。
可以根据竞争性结合量化抗原浓度。
提供相对于标准曲线的分析物浓度的直接测量。
可以基于直接、间接或夹心ELISA
缺点：
通常比夹心法或间接ELISA灵敏度低。
需要仔细优化抗原和抗体浓度。
更容易受到检测条件变化的影响而导致结果受到影响。
应用：竞争性ELISA的一些应用包括检测和量化小分子或抑制剂（例如药物、激素）、评估病毒学和疫苗研究中的抗体中和作用，以及筛查食品、环境样本或药品中的污染物或残留物。
