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品质保证 · 金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting试剂
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发布时间：2024-03-25 发布作者：金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting生物
ELISA是酶联免疫吸附测定的简称，是一种非常成熟的检测各种靶标（量化蛋白质、激素、抗体和其他分子）的方法。ELISA 的优点之一是其执行快速且简单，因此通常用于诊断和研究目的。ELISA 涉及酶的使用以及抗体和抗原的特异性结合。根据其工作原理，ELISA 可分为四种主要类型：直接法、间接法、夹心法和竞争法。让我们一一看看。
在直接 ELISA 中，仅使用酶标记的一抗，这意味着不需要二抗。酶标记的一抗“直接”与固定在板（固体表面）上的靶标（抗原）结合。接下来，与一抗连接的酶与其底物反应，产生可测量的可见信号。通过这种方式，检测到感兴趣的抗原。
图1（直接elisa）
在间接 ELISA 中，同时使用一抗和二抗。但在这种情况下，一抗未用酶标记。相反，二抗用酶标记。一抗与固定在板上的抗原结合，然后酶标二抗与一抗结合。最后，与二抗连接的酶与其底物发生反应，产生可测量的可见信号。
图2（间接elisa）
在直接和间接 ELISA 中，抗原固定在板上。然而，在夹心 ELISA 中，抗体被固定在板上，这种抗体称为捕获抗体。除捕获抗体外，夹心ELISA还涉及检测抗体的使用，一般包括未标记的检测一抗和酶标的检测二抗。
图3（夹心elisa）
首先，目标抗原与固定在板上的捕获抗体结合。其次，一抗与抗原结合。第三，检测二抗与检测一抗结合，然后酶与其底物发生反应，产生可测量的可见信号。
与上述三种ELISA类型相比，竞争性ELISA相对复杂，因为它涉及到抑制剂抗原的使用，因此竞争性ELISA也称为抑制性ELISA。事实上，直接、间接和三明治这三种形式中的每一种都可以适应竞争形式。在竞争性 ELISA 中，抑制剂抗原和目标抗原竞争与一抗的结合。以下是竞争性 ELISA 的程序：
图4（竞争elisa）
首先，将未标记的一抗与含有目的抗原的样品一起孵育，形成抗原抗体复合物（Ag-Ab）。在这一步中，抗体与抗原相比是过量的，因此还剩下游离的抗体。
其次，将 Ag-Ab 混合物添加到涂有抑制剂抗原的板中，该抗原也可以与一抗结合。混合物中的游离一抗与板上的抑制剂抗原结合，而混合物中的 Ag-Ab 复合物则不会结合，因此会被洗掉。
第三，将酶标记的二抗添加到板中并与板上的抑制剂抗原结合的一抗结合。
最后，添加底物与酶反应并发出可见信号以供检测。
通过此过程，您可能会发现最终信号与样品中感兴趣的抗原的量成反比，这意味着样品中的抗原越多，最终信号越弱。这是因为与样品抗原结合的一抗将被洗掉，而留下的游离一抗将被固定在板上的抑制剂抗原捕获并通过酶促反应进行测量。
这里描述的竞争性 ELISA 基于抗体捕获，其中板涂有抗原。还有另一种基于抗原捕获的竞争性 ELISA，其中板涂有未标记的抗体。此外，竞争性ELISA一般使用标记抗体进行检测，但有时也使用标记抗原而不是标记抗体。
直接、间接、夹心和竞争 ELISA 的比较
现在我们知道四种最常见的 ELISA 类型如何工作，但如何为您的实验选择正确的类型呢？要找到答案，您需要了解每种 ELISA 类型的优点和缺点
表 1. 每种 ELISA 类型的优点和缺点
优点
缺点
直接elisa
方案简单、省时、省试剂。
与二抗无交叉反应。
高背景。
无信号放大，因为仅使用一抗，不需要二抗。
灵活性低，因为一抗必须被标记。
间接elisa
信号放大，因为一种或多种二抗可用于与一抗结合。
高灵活性，因为相同的二抗可用于多种一抗。
与直接 ELISA 相比，方案更为复杂。
二抗的交叉反应。
夹心elisa
高灵活性。
高灵敏度。
高特异性，因为不同的抗体结合相同的抗原进行检测。
感兴趣的抗原必须足够大，以便两种不同的抗体可以在不同的表位处与其结合。
有时很难找到两种不同的抗体来识别目标抗原上的不同表位并以三明治形式很好地配合。
竞争elisa
高灵活性。
高灵敏度。
最适合检测小抗原，即使它们的浓度较低。
协议相对复杂。
需要使用抑制剂抗原。
定量和定性 ELISA
根据ELISA能否定量目标分子的水平，ELISA可分为定性和定量两种。定性 ELISA 为样品提供简单的阳性或阴性结果，而定量 ELISA 通过标准曲线反映样品中目标分子的浓度。因此，如果您想定量测定目标分子水平，请选择定量ELISA。
ELISA 可用于诊断和研究目的。ELISA检测的疾病包括HIV、HBV、流感、溶血性贫血、莱姆病、食物过敏等。上海金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting致力于提供高质量、可靠的ELISA试剂盒，准确、敏感、快速的检测结果，为您的实验保驾护航。