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品质保证 · 金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting试剂
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发布时间：2024-03-12 发布作者：金年会·(jinnianhui)金字招牌诚信至上-Gold Annual Meeting生物
在生命科学领域的许多情况下，及时且经济高效地检测和定量样品中的抗原或抗体非常重要。从识别接种疫苗或感染个
体的免疫反应，检测您希望在细胞表面表达的蛋白质的表达，到执行质量控制测试。拥有能够进行此类评估的工具是关键。
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酶联免疫吸附测定(ELISA)就是这样一种测试，已被证明作为研究和诊断工具具有无价的价值。作为科研人员，了解认识ELISA检测方法，不仅有助于他们更好地进行实验研究，更能为他们的科研成果提供有力支撑。
ELISA基于抗原抗体反应的概念，代表白细胞B细胞产生的抗体与抗原之间的化学相互作用。这种特定的免疫反应在保护身体免受病原体和毒素等入侵者的侵害方面发挥着重要作用。因此，通过利用这种反应，ELISA可以对抗原进行高度灵敏和选择性的定量/定性分析，包括蛋白质、肽、核酸、激素、除草剂和植物次生代谢物。为了检测这些分子，使用酶标记抗原或抗体，即所谓的酶免疫测定，其中碱性磷酸酶（ALP）、辣根过氧化物酶（HRP）和β-半乳糖苷酶都常用。液相中的抗原被固定在固相上，例如由硬质聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚丙烯构成的微量滴定板。随后，使抗原与特异性抗体反应，并通过酶标记的二抗进行检测。使用显色底物产生的颜色对应于抗原的存在。例如，ALP水解磷酸对硝基苯酯产生对硝基苯酚，可在405 nm（黄色）处检测到，而HRP催化显色底物的转化，例如2,2'-连氮基-双（3-乙基苯并噻唑啉）-6-磺酸）二铵盐、3,3',5,5'-四甲基联苯胺、邻苯二胺生成有色产品。通过使用化学发光底物（例如分别用于ALP和HRP的氯-5-取代金刚烷基-1,2-二氧杂环丁烷磷酸盐和鲁米诺）以及用于β-半乳糖苷酶的荧光底物（例如4-甲基伞形基半乳糖苷和硝基苯基半乳糖苷），可以实现更灵敏的检测取得成就。这些酶-底物反应通常在30-60分钟内完成，对于各个反应，通过添加适当的溶液（例如氢氧化钠、盐酸、硫酸、碳酸钠和叠氮化钠）来停止反应。最后，使用微量滴定板读数器检测有色或荧光产物。
ELISA有多种常用方法类型。但它们都利用在96孔聚苯乙烯板底部堆积的抗体和抗原。这些孔经过化学处理，使其具有“粘性”，从而增加了蛋白质吸附到板表面的能力。
ELISA测定依赖于酶结合标记和底物之间的酶促反应来产生比色、化学发光或荧光产物。然后通过分光光度计或荧光计检测和定量这些产物，提供有关样品中目标蛋白浓度的信息。
ELISA由多个步骤组成。其中许多步骤是封闭和洗涤步骤，以防止非特异性结合。当蛋白质通过脱靶相互作用相互吸附或吸附到ELISA板的塑料表面时，就会发生非特异性结合。不同方法之间的确切ELISA步骤略有不同，但这里我们将重点关注夹心ELISA作为示例。
第1步：捕获蛋白的固定化
在夹心ELISA中，捕获蛋白是抗体，目标是抗原。因此，ELISA的第一个步骤是将捕获抗体固定到板上。许多ELISA试剂盒都带有预先固定的捕获蛋白。
第2步：洗掉孔表面任何未吸附的捕获蛋白
使用去污剂的洗涤步骤可减少蛋白质之间的脱靶疏水相互作用，并从板上去除未结合的捕获蛋白质。
第3步：封闭板上任何未结合的位点
蛋白质之间的疏水相互作用是由电荷或疏水性介导的。这意味着可以通过封闭和清洗步骤在一定程度上减轻它们。
将蛋白质添加到板中，蛋白质吸附到板表面的开放位点。牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白或抑肽酶等蛋白质通常用于ELISA测定中的封闭。
这些蛋白质将吸附到板上，从而防止目标蛋白质随后访问这些位点。以这种方式降低非特异性结合的发生率会导致背景噪音降低。
第4步：洗掉孔中所有未吸附的封闭蛋白
第二个洗涤步骤去除任何未结合的封闭蛋白。
第5步：与样品（血清、尿液、唾液或加标研究溶液）一起孵育
在这一步中，抗体和抗原之间发生特异性识别。在夹心ELISA中，抗体被吸附到板上，并与样品液中的目标抗原结合。这需要一个孵育步骤以使结合动力学达到平衡。
第6步：洗掉孵化液
这是至关重要的洗涤步骤，通常需要多次洗涤以确保洗掉任何未结合的抗原。在此步骤之后，孔中唯一应保留的抗原是那些附着于捕获抗体的抗原。
第7步：与检测抗体一起孵育
ELISA中的检测抗体与某种标记物结合，例如荧光团（用于荧光测定）或酶（用于比色检测或化学发光）。检测抗体“识别”目标抗原上与捕获抗体不同的表位。因此，三明治ELISA测定产生捕获抗体-抗原-检测抗体的“三明治”。
第8步：洗掉未结合的检测抗体
步骤9：应用底物进行化学比色或化学发光反应，或应用入射光进行荧光反应，并对信号进行定量
根据所使用的ELISA方法，荧光量、发光量或颜色强度表明从样品中捕获了多少目标抗原。
在生命科学领域，科研人员经常需要运用各种检测方法对生物样本进行定性和定量分析。酶联免疫吸附测定（ELISA）作为其中的一种常用技术，与其他检测方法相比，既存在相似之处，也有其独特之处。为了更直观的表达，下面就以表格对比：
|
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ELISA |
其他免疫学检测方法（如免疫荧光、免疫组化） |
PCR（聚合酶链式反应） |
免疫印迹 |
|
原理 |
抗原-抗体特异性结合，酶促反应放大信号 |
抗原-抗体特异性结合 |
DNA复制扩增特定序列 |
蛋白质与抗体的特异性结合 |
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操作流程 |
简便、快速，高通量 |
相对简便，但可能涉及荧光标记等步骤 |
复杂，需要精密的仪器和严格的实验条件 |
相对复杂，涉及电泳、转膜等步骤 |
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检测范围 |
抗原、抗体检测，广泛适用于多个领域 |
抗原、抗体检测，多用于组织或细胞定位 |
DNA、RNA特定序列检测 |
蛋白质表达分析 |
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灵敏度和特异性 |
高灵敏度和特异性 |
高灵敏度和特异性 |
极高灵敏度和特异性 |
高灵敏度和特异性 |
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样本要求 |
对样本纯度要求较高 |
对样本纯度有一定要求 |
对DNA/RNA质量要求较高 |
对蛋白质样本质量有一定要求 |
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结果解读 |
需要谨慎，避免干扰因素影响 |
需要根据荧光信号等判断 |
需要通过凝胶电泳和序列分析 |
通过条带位置和强度分析蛋白质表达 |
|
适用场景 |
疾病诊断、药物研发、环境监测等 |
组织学、病理学等研究 |
基因检测、疾病诊断、分子生物学研究 |
蛋白质表达分析、信号通路研究 |
请注意，这个表格只是对ELISA和其他几种常见检测方法的一个简要对比，实际上每种检测方法都有其独特的特点和适用场景。科研人员在实际应用中，需要根据具体的研究需求和实验条件来选择最合适的检测方法。
ELISA可用来定量一份检测样品中的一种或多种抗原。鉴于抗体试剂的特异性以及检测的简易性，ELISA通常被视为生物样品定量检测的金标准。在生物医学/生物化学领域，使用抗体-抗原结合连同信号放大的ELISA原理的检测非常普遍。在研究实验室，这些检测可用来定量蛋白水平或通路激活。在临床上，ELISA有各种用途，包括测定患者血清样品中药物治疗的生物标记物或细胞因子水平。ELISA还适用于植物生物学，并且可用于检测农作物过敏原。
在多种研究领域都会用到ELISA平台。它能特异并灵敏地检测抗体，因此是一种方便的生物发现工具。它在所有生物研究领域中被广泛用来检测和定量目的抗原。这类抗原会被分泌成细胞培养基、某种细胞中的总蛋白，或细胞信号转导期间发生的翻译后修饰(PTM)。
除了用于研究之外，ELISA还广泛用于诊断检测，包括对病毒感染、食物过敏原、毒性和癌症的诊断检测。用抗体检测感染性病毒是一种快速的临床检测，这种检测在扩展后可同时检测多份样品。这些检测通常在血清或血样上完成，但也可以使用细胞或组织的裂解物进行。
随着生命科学技术的不断进步和科研需求的日益增长，酶联免疫吸附测定（ELISA）作为一种经典且广泛应用的检测技术，其发展趋势也备受关注。未来，ELISA检测将在以下几个方面展现出明显的发展趋势：
一、自动化和智能化将成为ELISA检测的重要发展方向。传统的ELISA实验操作过程虽然相对简便，但仍存在繁琐的样本处理、试剂添加和结果判读等步骤。随着自动化仪器和人工智能技术的不断发展，未来的ELISA检测将实现更高程度的自动化和智能化，从样本处理到结果分析，整个过程将更加快速、准确和便捷。
二、高灵敏度和高特异性将是ELISA检测追求的另一个重要目标。随着科研人员对疾病发病机制、药物作用机制等问题的深入研究，对检测技术的灵敏度和特异性要求也越来越高。未来，通过优化抗体选择、改进实验条件、引入新的信号放大技术等手段，ELISA检测的灵敏度和特异性将得到进一步提升，为科研人员提供更加准确、可靠的数据支持。
三、多重检测和微型化也是ELISA检测未来的发展趋势之一。多重检测能够同时检测多种抗原或抗体，提高检测效率和通量；而微型化则能够减少样本和试剂的用量，降低成本，同时便于现场快速检测。这些技术的发展将使ELISA检测更加适应复杂多样的科研需求。
四、随着生命科学的快速发展，交叉学科的研究也越来越受到重视。未来，ELISA检测将与其他技术如基因测序、蛋白质组学等相结合，形成多技术融合的检测平台，为科研人员提供更加全面、深入的分析手段。
ELISA是用来检测什么？通过上述介绍，相信您对elisa检测有所了解。ELISA在科研领域重要性是不言而有的，ELISA在不断的推动生命科学的发展，作为科研人员，我们与时俱进，不断的深入学习和掌握ELISA检测技术，推动科研进步！